植入前遗传学诊断可鉴定婴儿性别

植入前遗传医学诊断（Preimplantation Genertic Diagnosis PGD)是辅助生育技术与分子生物学技术相结合而发展的产前诊断技术。它与传统的产前诊断技术具有相同的目的，但与传统的产前诊断方法不同的是，PGD是对体外受精的胚胎进行遗传学诊断，在确定正常后再将胚胎植入子宫，这祥可避免选择性流产，并减轻终止异常胎儿妊娠给妇女带来的心理压力。PGD技术的出现同时给基因治疗技术也带来希望，因此，PGD技术是现代医学的重大进展。

　　60年代，Edwards就提出了胚胎植入前遗传学诊断的设想。80年代后。Y．Verlinky，Handyside，Wilso等相继成功地建立了卵裂期胚胎活检的动物模型。在经历了20余年的发展后，Handyside对1例性连锁遗传病夫妇的胚胎成功地进行了PGD，并获得妊娠。在1990年诞生了世界上首例PGD后的健康女婴。

　　目前世界上有40多个生殖医学中心可进行PGD，我国首例经PGD的女婴于1998年在中山医科大学庄广伦教授领导的生殖医学中心诞生。至今世界上有超过200多名经PGD出生的正常婴儿。到1997年世界上报道了约800个PGD周期。主要用于性连锁疾病的诊断，以及染色体病或单基因遗传病的诊断。但目前有两个主要因素影响PGD的临床发展；首先，只有那些在生殖医学和分子生物学相密切结合并已有对单个细胞进行基因分析的专业设备，又有一定财力的生殖医学中心才有能力进行临床PGD。第二，染色体的变异及单基因缺陷病需要各研究中心协作研究，以及对荧光原位杂交(FISH)及PCR技术的实验条件进行设计的检测。

　　1可利用PGD进行检测的遗传病
常染色体显性遗传
马凡氏综合征
Huntington’s综合征
强直性肌萎缩
家族性腺纤维囊肿
常染色体隐性遗传
囊性纤维瘤
TaU-Sachs病
Lesch-Nyhan综合征
β—地中海贫血
　镰刀细胞病
　脊柱肌萎缩
x连锁遗传病
X连锁隐性遗传病中鉴定胎儿性别
假性肥大型肌营养不良
血友病A
　脆性x综合征
严重的复合免疫缺陷
白化病
非整倍体
女方高龄
平衡易位携带者
　性腺嵌合型

　　2关于PGD
　　2．1PGD材料来源
　　2．1．1卵细胞或第一极体、第二极体分析
　　对卵细胞不能采用直接法诊断，因此法可损伤卵细胞，而一种很少见的影响线粒体的遗传性疾病可吸取少量胞浆就够进行诊断了。由于卵细胞减数分裂过程中同源染色体之间配
对，交换遗传物质，所以正常变异的基因部可能出现在圾体中。因此，可取第一极体进行诊断，但第一极体的DNA量有限，而且是间接反映卵细胞的情况，所以较直接取分裂球期胚胎细胞的可靠性相对较差．也可取第二极体对单基因缺陷进行检测，但也存在上述可能．
　　2．1．2从卵裂球期胚胎获得单个细胞
　在受精卵分裂到4—8个细胞期时，用显微操作仪吸取1—2个卵裂球细胞进行遗传病的诊断，而这一过程不影响胚胎的继续发育。有文献报道，活检过的卵裂球胚胎比对照组有更多的胚胎发育至桑椹胚。利用这些细胞可以做非整倍染色体分析，以及更多的遗传检测。
　　2．1．3从囊胚期胚胎获得滋养外胚层细胞
　　用显微操作法从囊胚期胚胎滋养外胚层吸取30-50个细胞作遗传学诊断，这一过程不影响胚胎的孵化或体外培养分泌hCG。用囊胚期胚胎细胞的优点是无碎片和降解细胞，而卵裂期胚胎常有碎片和降解细胞。目前存在的问题是体外培养的胚胎仅有20％、50％能够发育到囊胚期。
　　2．1．4其他胚胎活检方法
　　因在囊胚期胚胎的囊胚腔中可能悬浮着少许细胞，它们是滋养外胚层粘连较松的细胞或内细胞团细胞，或在冷冻过程中脱落的细胞。因此可用10—12μm的穿刺针直接吸取这些细胞进行遗传学诊断。有文献报告从鼠胚囊胚腔中取出5个细胞，1—3h后胚胎发生再扩张、孵化。说明该技术对囊胚期胚胎发育无影响。
　　需要诊断的遗传疾病决定活检细胞的种类，如需诊断几种疾病则需获取几个细胞，还必须十分小心地去除透明带下的精子，因为它们的DNA会影响胚胎染色体的诊断。
　　
　　2．2PGD的诊断方法
　　2．2．1PCR技术在PGD的应用
　　PCR技术主要应用于单基因缺陷遗传病的诊断，如β-地中海贫血、血友病等，目前采用PCR进行PGD诊断有极体和卵裂球单个细胞分析两种方法。PCR技术能扩增样本中少量甚至痕迹量的DNA。因此吸取1—2个卵裂球细胞做遗传学检查首先就选择了PCR技术。1989年Handside取出单个卵裂球细胞，运用PCR技术成功扩增了Y染色体特异重复序列。在1990年Handside报道了用PCR技术对有高风险DMD(假性肥大型肌营养不良)患者的夫妇进行PGD后诞生的首例健康女婴。

　　尽管PCR在PGD中起了重要的作用，但PCR对单个细胞扩增失败率高。由于获得细胞数目极少，而致使对单个细胞只能作一次分析，不能重复实验结果。因此，许多的研究改变了PCR方法，用于控制扩增失败。如采用引物延伸预扩增技术(PEP)，以随机引物对单个细胞基因组进行全基因扩增，使对单个细胞进行多位点分析成为可能。
　　2．2．2荧光原位杂交(FISH)在PGD中的应用
　　荧光原泣杂交是用荧光标记的DNA探针与细胞核内或染色体中特定的DNA序列反应，用荧光显微镜可观察到诊断结果。FISH主要用于染色体疾病的诊断。目前可以用FISH对常见的非整倍体异常如X、Y、13，16，18，21号染色体作出诊断。而国内IVF助孕的患者中50％以上年龄超过35岁，因此应用FISH技术对卵细胞极体和卵裂球细胞PGD具有重要意义。因为此年龄组的妇女容易产生染色体异常的胎儿。FISH与PCR相比较有不会产生污染，能够检测染色体数目变异的优点。但也存在一定的局限性，如对45XO或YO，18单体核型的胚胎细胞，FISH诊断可能存在错误，出现这一结果时有两种可能，一是被检测的单个细胞就是单体核型的细胞；也可以是技术方法问题未能显示另一个杂交信号。

　　因此在临床PGD时应获取两个卵裂球细胞或足够量的极体进行遗传学诊断。
　　3 PGD后妊娠及新生儿情况
　　在近2年来PGD发展较快，并已有超过200多名经PGD后出生的新生儿。从已公布的文献分析，未发现PGD导致IVF的妊娠率明显下降。　　

　　Handside报道(Second Workshop on ART1999．11．24—28H．K)来自欧洲16个生殖医学中心的PGD323例IVF病人，PGD后妊娠率为25％，生产率为24％，新生儿平均出生体重2850g土740g，平均身长48．3土5．3cm，但由于临床PGD周期及临床PGD后出生的新生儿数有限，所以对PGD后妊娠率、新生儿出生缺陷及遗传病诊断的准确性都有待于积累更多的文献资料分析。

　　尽管PGD应用还仅仅局限在极少数遗传性疾病方面，但随着人类对遗传疾病致病基因的破译及诊断技术的改进，PGD在人类疾病预防及治疗上将发挥重要的作用。